>> HOME >> Bioanalytik HPLC >> Fluessigkeitschromatographie >> Rheos Allegro UHPLC

Rheos Allegro UHPLC

Ultra HPLC: LC auf der Überholspur

Analysengeschwindigkeit, chromatographische Auflösung, Empfindlichkeit. Das sind drei Parameter, die für die meisten LC-Anwender kritische Bedeutung haben. Bedingt durch die ständig wachsende Anzahl von Proben ist für viele Anwender der Durchsatz eine wichtige Größe. In einigen Bereichen wie beispielsweise in der Pharmaforschung oder in Kliniken ist zudem die schnellstmögliche Verfügbarkeit der Ergebnisse von entscheidender Bedeutung.

Um diesen Anforderungen gerecht zu werden, wurden immer leistungsfähigere LC-Anlagen, insbesondere aber auch effizientere Trennsäulen entwickelt (reduzierte Partikelgrössen, Kieselgelreinheit, Derivatisierung).

Eine drastische Reduzierung der Analysenzeiten lässt sich nun durch den Einsatz von Säulen mit sehr kleinen Partikeln (<2 μm, UHPLC, Ultra High Performance Chromatography) realisieren. Die van Deemter-Kurve, die den Zusammenhang zwischen Trennstufenhöhe und linearer Eluentenfliessgeschwindigkeit beschreibt, zeigt für Säulen mit Partikelgrössen < 2 μm eine geringe Trennstufenhöhe (d.h. hohe Trennleistung) und einen sehr flachen Verlauf. In der Praxis bedeutet das, dass es mit UHPLC-Säulen möglich ist, die Flussrate zu erhöhen und damit die Analysenzeit wesentlich zu verkürzen ohne an Trennleistung zu verlieren. Typischerweise liegen die Flussraten in der Ultra HPLC 3-5 mal höher als bei der HPLC (z.B. 1 mL/min für eine 2 mm-ID-UHPLC-Säule, statt 0.3 mL/min mit einer Standard-2mm-ID-Säule). Die Analysenzeit eines Steroidhormons (CMA) und zweier isomerer Metaboliten konnte durch Einsatz der Ultra HPLC um den Faktor 10 reduziert werden.

Auch in Punkto Empfindlichkeit ist die Ultra HPLC ein großer Fortschritt. Da sehr schmale Banden bei gleicher Fläche eine höhere Intensität und somit höhere Konzentration aufweisen, nimmt generell das Signal/Rausch-Verhältnis und damit die Empfindlichkeit zu.

Durch ihre enorme chromatographische Trennleistung bieten UHPLC-Systeme besonders bei komplexen Gemischen (z.B. Proteinverdaue) entscheidende Vorteile. In kürzerer Zeit lassen sich wesentlich mehr Substanzen chromatographisch auftrennen und quantifizieren.

Um sowohl die neuen UHPLC-Säulen verschiedener Hersteller als auch bewährte HPLC-Säulen optimal einsetzen zu können, hat Flux Instruments die neue Rheos Allegro speziell für LC-MS Anwendungen entwickelt. Das besonders bei der Hochdurchsatz-LC schädliche Totvolumen konnte weiter reduziert werden. Die Rheos Allegro hat mit 70 μL eines der niedrigsten schädlichen Totvolumen aller LC-Pumpen (auch solcher mit sog. Low delay volume-Konfigurationen). Damit sind extrem schnelle Gradientenfolgen möglich, was die Produktivität im Labor entscheidend erhöht. Die neuentwickelte Steuerung in Kombination mit der optimierten kinematischen Auslegung führt zu einer exzellenten Genauigkeit der Gradientenformung und minimaler Restpulsation (<0.5% bei 750 bar). Das bedeutet für den Anwender, dass er präzise Ergebnisse schnell und reproduzierbar erzielt. Die Steuerung der Rheos Allegro kann über die Softwarepakete verschiedener MS-Hersteller erfolgen.

Das Rheos Allegro UHPLC System lässt sich ausgezeichnet mit der CTC HTS/HTC PAL Autosamplerfamilie automatisieren.

Die wichtigsten Merkmale dieser LC-MS Front-End Kombination im Überblick:

Optimal für 1 und 2 mm UHPLC- oder HPLC-Säulen von 30-100 mm Länge
geringstes Totvolumen
Hochdruckfest bis 1000 bar
Carry Over Minimierung mittels effizienter Ventilspülung
Einbindung der CTC / Rheos Allegro UHPLC in folgende Softwarepakete: Thermo Xcalibur, ABI/Sciex Analyst, Thermo ChromQuest/EZChrom

So werden LC-MS Analysensysteme in einer Vielzahl von Applikationen effizienter und ökonomischer betrieben. Zu diesen Anwendungsbereichen gehören Applikationen der pharmazeutischen und chemischen Industrie, der Biotechnologie und der Lebensmittel-Analytik.

Keywords: UHPLC, UPLC


Van-Deemter-Kurven für verschiedene Partikeldurchmesser	Flyer Rheos Allegro UHPLC	Quaternäre Proportionierung, Pumpenkopf, Verdrängerkammer - minimales Totvolumen & einfachste Zugänglichkeit